Olbrzymia formacja osteoklastów i długotrwała doustna terapia bisfosfonianami cd

Każda próbka została zakodowana w taki sposób, że czytelnik nie był świadomy przydzielenia grupy badanej pacjentowi. Stwierdzono już, że w grupie alendronianowej w porównaniu z grupą placebo stwierdzono prawidłową grubość osteoidu i zmniejszoną powierzchnię mineralizacyjną (długość kości gąbczastej znakowanej podwójnie tetracykliną i połowę długości kości gąbczastej znakowanej pojedynczą tetracykliną). 3 Zgodnie z naszą wiedzą nie odnotowano wcześniej częstości tworzenia kości i mineralnego przyłożenia oraz liczby osteoklastów. Pomiary histomorfometryczne
W ciągu 24 godzin po biopsji próbki utrwalono w lodowatej 10% formalinie buforowanej fosforanem Milloniga o pH 7,4 i wysłano przesyłką ekspresową do University of Arkansas for Medical Sciences. Na uniwersytecie próbki odwadniano w stopniowanych roztworach etanolu i osadzano je w niewulkanizowanym metakrylanem metylu.18 Ostrza obrotowe z mikrotomem z węglika wolframu o kształcie litery D (Delaware Diamond Knives) były ostrzone co 2 tygodnie, aby zachować jakość sekcji. Przekroje podłużne o grubości 5 .m pobrano z jednej trzeciej i jednej połowy głębokości próbek. Dwie sekcje z każdej głębokości pozostały nie wybarwione w celu zbadania znaczników tetracyklinowych, a dwie sekcje wybarwiono modyfikacją techniki Massona w celu zwiększenia szczegółów jądrowych.13 Dodatkowe sekcje barwiono na kwasoodporną kwasową fosfatazę (TRAP) .19,20 Barwienie TRAP przeprowadzono w celu potwierdzenia, że nienormalne komórki były rzeczywiście osteoklastami, ale barwienie TRAP upośledza szczegóły jądrowe. Dlatego też wszystkie pomiary osteoklastów przeprowadzono na odcinkach zabarwionych Massonem. Szkiełka nakrywkowe zostały skompresowane przy użyciu 2-oz (około 60-g) wagi rybaków przez 30 minut, aby ułatwić produkcję gładkich, płaskich sekcji bez zniekształceń.
Ryc. 1. Ryc. 1. Prawidłowy wielojądrowy osteoklasta ściśle przylegający do kości od pacjenta otrzymującego placebo. Interfejs z obwodem kostnym jest zaznaczony falistą lub prążkowaną granicą mikrokosmków (biała strzałka), którą najlepiej zwizualizować za pomocą mikroskopii elektronowej, ale demonstruje tu granica ciemno-czerwona. Interfejs osteoklast-kostny tworzy wyjątkowe mikrośrodowisko zewnątrzkomórkowe, idealne do resorpcji kości. Strefa wakuolarna bogata w lizosom (czarna strzałka), złożona z zakwaszonych pęcherzyków zawierających katepsynę K i metaloproteinazy macierzy, jest wyraźnie wizualizowana. Spolaryzowane z dala od powierzchni kości to sześć jąder z wybitymi jąderkami. Zdjęcie wykonano za pomocą soczewki Zeiss 1,6 × Optovar i 100-krotnego zanurzenia w oleju Plan-Apochromat z 1.40 aperturą numeryczną.
Badanie histomorfometryczne wykonano przy użyciu tabletu digitalizującego (OsteoMetrics) połączonego z Axioscope Zeiss z zamocowaniem do probówki, jak opisano wcześniej.13,7,17,18,21 Całkowita liczba osteoklastów na kości gąbczastej lub sąsiadujących z nią wyrażone jako liczba na milimetr obwodu kości gąbczastej. Olbrzymi osteoklast został zdefiniowany jako mający co najmniej trzy z następujących cech: więcej niż osiem profili jądrowych (dwuwymiarowe obrazy przekroju wykonanego przez obiekty trójwymiarowe), oderwanie od kości, płytkie lub nieobecne wnęki do resorpcji, jądra pyknotyczne lub obecność innych jednojądrzastych komórek umieszczonych między obwodem kości a osteoklastem
[więcej w: laryngolog co to za lekarz, usg ortopedyczne kraków, schizofrenia opis przypadku ]